碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase，简称T4 PNK，中文名称T4多聚核苷酸激酶，是一种多聚核苷酸5'羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其它NTP也可产生相同的反应：5'-OH + NTP → 5'-P + NDP。 上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 Polynucleotide Kinase可以显示出5'磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其它NTP也可产生相同的反应：5'-P + NDP → 5'-OH + NTP (最适pH为6.4左右)。 当ATP和ADP都适量存在时，T4 Polynucleotide Kinase可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其它NTP也可产生相同的反应：5'-P + NTP + NDP → 5'-P + NDP + NTP。 T4 Polynucleotide Kinase同时具有3'磷酸酯酶活性，可催化3'磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3'-P → 3'-OH + Pi (最适pH为5.9左右)。 T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在N-末端附近，而磷酸酯酶活性在C-末端附近。 碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase催化单链DNA 5'端磷酸化的效果请参考图1。 图1.碧云天生产的T4 Polynucleotide Kinase催化单链DNA 5'端磷酸化的效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的T4 Polynucleotide Kinase，在50µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的T4 Polynucleotide Kinase，37℃孵育30min进行反应，65℃孵育20min以终止反应。取出20μl反应液，用增强型ATP检测试剂盒(S0027)检测反应体系中剩余ATP的浓度，根据反应体系中剩余ATP的浓度计算出反应体系中剩余ATP的量，根据反应体系中剩余ATP的量和初始加入的总量计算出反应体系中消耗掉的ATP量，消耗掉的ATP量可以反映T4 Polynucleotide Kinase的活性。以反应体系中加入的酶量为横坐标，消耗掉的ATP量为纵坐标作图。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化单链DNA 5'端磷酸化效果。反应体系(50μl): 70mM Tris-HCl (pH7.6 at 25℃), 10mM MgCl2, 5mM DTT, 2µM ATP, 2µM ssDNA，以及加入1µl不同浓度的T4 Polynucleotide Kinase。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、DNA或RNA的5'端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3'磷酸化的单核苷酸的5'磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3'末端连接；去除3'端磷酸基团。 来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。 活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme catalyzing the incorporation of 1 nmol of phosphate from ATP to 5’-OH DNA in 30 minutes at 37℃。 纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。 酶储存溶液：10mM Tris-HCl (pH7.4), 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1µM ATP, 50% glycerol。 T4 PNK Buffer (10X)：700mM Tris-HCl (pH7.6 at 25℃), 100mM MgCl2, 50mM DTT。 缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X G、1X O、1X Y 、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X R中的活性为75-100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为50-100%。 失活或抑制：75℃加热10min或65℃加热20min或可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。

保存条件：-20℃保存，至少2年有效。

注意事项：铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 Polynucleotide Kinase的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 Polynucleotide Kinase的酶活性。
PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。