RealPAGE plus彩色凝胶快速制备试剂盒  RealPAGE plus Colour Gel Fast Preparation Kit
  货品规格： 货号 说明 制胶数量 RTD6132-06 制备6%PAGE胶 125块 0.75mm胶 ＞90块1 mm胶 ＞60块1.5 mm胶 RTD6132-08 制备8%PAGE胶 RTD6132-10 制备10%PAGE胶 RTD6132-12 制备12%PAGE胶 RTD6132-15 制备15%PAGE胶
  货品内容： 组份 货号 名称 规格 保存 1 RTD6132-UA 上层胶溶液A 80 ml 4℃ 2 RTD6132-UB 彩色上层胶溶液B 80 ml 4℃ 3 RTD6132-LA06 下层胶溶液A 6% 250 ml 4℃ RTD6132-LA08 下层胶溶液A 8% 250 ml 4℃ RTD6132-LA10 下层胶溶液A 10% 250 ml 4℃ RTD6132-LA12 下层胶溶液A 12% 250 ml 4℃ RTD6132-LA15 下层胶溶液A 15% 250 ml 4℃ 4 RTD6132-LB 下层胶溶液B 250 ml 4℃ 5 RTD6132-SP 改良型促凝剂 8 ml 4℃，配制后-20℃贮存 说明书 一份
 产品简介： 该产品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理，采用合理设计的预混合配方和配制流程，可在50分钟内配制得到高质量的聚丙烯酰胺凝胶，用于变性和非变性蛋白凝胶电泳。本产品可以配制常用分离胶浓度6%、8%、10%、12%和15%，可以满足绝大多数蛋白电泳需求。 本试剂盒大约可以配制60-125块常规大小（8×10cm）PAGE凝胶，具体数量根据凝胶厚度决定：0.75mm厚度凝胶可以配制125块胶，1mm厚度凝胶可以配制至少90块胶，1.5mm厚度凝胶可以配制至少60块胶。
运输和贮存： 本产品常温运输；组份按照标签温度贮存；有效期一年。
 特点： 1. 方便：彩色上层胶，方便上样；上层胶和下层胶溶液1:1混合，无需计算； 2. 安全：不用接触有毒粉末；不用单独添加TEMED； 3. 兼容性广：制胶溶液中不含SDS，可用于非变性电泳（Native-PAGE）；
 使用说明： 一  凝胶制备： 1.1参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。 1.2 根据下表参考选择合适的凝胶浓度 表一不同浓度的PAGE下层胶的最佳分离范围 下层胶（分离胶）浓度 最佳分离范围 6% 50-350 kD 8% 35-300 kD 10% 20-150 kD 12% 15-100 kD 15% 10-80 kD 1.3 根据下表配制凝胶： 表二 凝胶配制表 下层胶配方 上层胶配方 胶厚度 下层胶溶液B 下层胶溶液A 改良型促凝剂 胶厚度 彩色上层胶溶液B 上层胶溶液A 改良型促凝剂 0.75 mm 2 ml 2 ml 40 μl 0.75 mm 0.5 ml 0.5 ml 10 μl 1.0 mm 2.5 ml 2.5 ml 50 μl 1.0 mm 0.75 ml 0.75 ml 15 μl 1.5 mm 4 ml 4 ml 80 μl 1.5 mm 1 ml 1 ml 20 μl 1.3.1 取等体积下层胶溶液B 和下层胶溶液A ，各 2.0/2.5/4.0 ml，混匀； 1.3.2混合溶液中加入 40/50/80 μl的改良型促凝剂，轻轻混匀，将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可； 注意：此溶液为过量，请勿全部注入。 1.3.3 沿玻璃板缓慢加入适量灭菌水或无水乙醇覆盖于下层胶之上，待下层胶凝固后，倒去上层水或乙醇； 注意：当水（乙醇）和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝固；25℃时5-10分钟可以聚合。 1.3.4 取等体积彩色上层胶溶液B和上层胶溶液A ，各 0.5/0.75/1.0 ml，混匀； 1.3.5向混合溶液中加入 10/15/20 μl 的改良型促凝剂，轻轻混匀，插入梳齿； 1.3.6 待上层胶凝固后 （约20-40 min），拔去梳齿即可用于电泳。 注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。 上层胶25℃ 20-25分钟可以聚合；18℃ 35-40分钟可以聚合。 二  电泳： 2.1 SDS-PAGE变性电泳： 2.1.1电泳缓冲液配制： 将5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液干粉（自备，组份0.96 M 甘氨酸，0.125 M Tris，0.5% SDS）全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。 2.1.2 样品处理：融化-混合-变性-上样 5×MonoColor蛋白上样缓冲液常温数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀；将缓冲液与蛋白样品按照1：4的比例混匀，如8 μl样品加入2 μl 5×上样缓冲液；将蛋白样品置于95℃中加热5-10分钟；蛋白样品加入凝胶加样孔内电泳。 2.1.3 电泳过程； 在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，用1ml吸头彻底冲洗加样孔，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。 表三 SDS-PAGE电泳条件 恒电压 起始电流（一板胶） 结束电流（一板胶） 电泳时间 适用条件 150V 35-40 mA 15-20 mA 55 + min 最佳电压，最优的分辨率 200V 45-55 mA 20-25 mA 45+ min 节省时间 225V 40-50 mA 15-20 mA 35+ min 250V 65-75 mA 20-25 mA 30+ min 300V 70-80 mA 25-35mA 25+ min 最省时间 2.2 非变性电泳（Native PAGE）： 2.2.1电泳缓冲液配制： 将5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉（自备，组份0.96 M 甘氨酸，0.125 M Tris）全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。 2.2.2 样品处理：融化-混合-上样 5×非变性非还原蛋白上样缓冲液常温数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀；将缓冲液与蛋白样品按照1：4的比例混匀，如8 μl样品加入2 μl 5×上样缓冲液；蛋白样品加入凝胶加样孔内电泳。注：非变性电泳样品不能加热处理。 2.2.3 电泳过程； 在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，用1ml吸头彻底冲洗加样孔，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。     表四 Native PAGE电泳条件   恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 适用条件 推荐电压 150V 25-35/板胶 5-10 mA/板胶 60 + min 最佳电压，最优的分辨率 三. 染色： 1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。 2. 摇床常温摇动10-15分钟至条带清晰可见。 3. 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1-2次蒸馏水，摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。 4. 观察保存结果。 四. 实验示例：