10×RealBlot 快速转膜液                  10×RealBlot Rapid Transferbuffer            
产品组成： 货号 名称 规格 保存条件 RT5020 10×RealBlo快速转膜液 500 ml 4℃ 说明书 一份
产品简介： 快速转膜液使用独特配方，能高效快速地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。使用湿转法（Tank blot）或半干转法（Semi-dry blot）方法，能在10-40分钟内完成转膜过程。 快速和环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。 兼容性好：快速转膜液能兼容Laemmli胶，预制胶，Bis-Tris胶等多种凝胶。 转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。
贮存及运输：   4-8℃贮存，有效期一年；常温运输。
使用说明： 转膜前的准备： 6-10张裁好的普通滤纸或Whatman3MM滤纸；裁好的转印膜；足够的1×快速转移buffer；无水甲醇（处理PVDF膜用） 一 湿转法（Tank blot）： 1 按照下表配制1×快速转膜液 1×快速转膜液配制量  1000ml 10×快速转膜液 100 ml 无水乙醇 200 ml 超纯水 700 ml 2 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。 3 PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，随后浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟；NC膜无需处理，直接浸泡在转膜缓冲液中。 4 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。 注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。 5 按照以下顺序做好转印三明治结构： 1 负极（阴极） 2 一块海绵 3 滤纸（3张） 4 凝胶 5 转印膜 6滤纸（3张） 7 一块海绵（根据三明治的厚度选择是否使用） 8 正极（阳极） 注意：  ① 要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。  ② 三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话，可以去除阳极一侧的海绵。 6 将三明治结构放于转移槽中，转印槽中灌满1×快速转膜液。 7 湿转推荐使用恒流转移： 电流 转移时间 电压变化 300 mA 30 to 35 min 50-55 V 350 mA 25 to 30 min 55-58 V 375 mA 20 to 25 min 58-62 V 400 mA 15 to 20 min 58-65 V 二 半干转（Semi-dry blot）： 1 按照下表配制1×快速转膜液： 1×快速转膜液配制量  500ml 10×快速转膜液 50 ml 无水乙醇 100 ml 超纯水 350 ml 2 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。 3 PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。NC膜无需处理，直接浸泡在转膜缓冲液中。 4 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。 注意：水中漂洗时间不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白可能不能完全转移。 5 按照以下顺序做好转印三明治结构： 1 负极（阴极） 2 下层滤纸（5张） 3 凝胶 4 转印膜 5 上层滤纸（5张） 6 正极（阳极） 半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，接触的滤纸和气泡会造成短路。 6 半干转推荐使用恒流转移： 恒电流 转移时间 电压变化 400 mA 25-30min 9-13 V 注：不同厂家半干转仪器设置可能有所不同，请根据厂家说明书适当调整。 三 问题解决： 问题 可能原因 解决方法 转膜不充分 湿转转移槽铂金丝有盐沉积 彻底用超纯水清洗转移槽 转移膜，滤纸，凝胶没有在1×转移缓冲液中彻底平衡 转移膜，滤纸，凝胶要在1×快速转膜液中平衡5分钟，震荡平衡更好 PVDF膜没有用甲醇预处理 PVDF膜要用甲醇彻底润湿，然后在1×快速转膜缓冲液中平衡5分钟 转膜时间不充分 适当延长转膜时间 不连续的转膜 凝胶和膜之间有气泡 转膜三明治做好后，用滚轴把凝胶和膜之间的气泡赶走 PVDF膜没有用甲醇预处理 PVDF膜要用甲醇润湿，然后在1×快速转膜缓冲液中平衡5分钟 转膜设备不工作 电泳电源不配套 电泳电源要符合以下参数：300W，5-300V，0.01-3A    实验示例：