Annexin V-FITC Apoptosis Detection KitAnnexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒(增强型) 产品简介:在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素 FITC 标记,以标记了的 Annexin V 作为荧 光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V与 PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。产品组分:产品编号产品名称规格储存条件1AnnexinV-FITC250uL2-8℃,避光2Propidium Iodide250uL2-8℃,避光3Binding Buffer25 mL2-8℃ 使用方法:1、悬浮细胞离心(2000rpm 离心 5min)收集;贴壁细胞用不含 EDTA 的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不 易过长,否则容易引起假阳性);2、用 PBS 洗涤细胞二次(2000rpm 离心5min)收集 1~5×105 细胞;3、加入500uL 的 Binding Buffer 悬浮细胞;4、加入5uL Annexin V-FITC 混匀后,加入 5 uL Propidium Iodide,混匀;5、室温、避光、反应5~15min;6、请在1h 内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。A.荧光显微镜观察1) 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;2) 对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;1、将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;2、用PBS洗涤细胞两次;3、在500uL的Binding Buffer 中加入 5uL Annexin V-FITC,5 uL Propidium Iodide,混匀;4、将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;5、避光、室温反应5 min。6、将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC和罗丹明)观察。Annexin V-FITC 荧 光信号呈绿色,PI 荧光信号呈红色。B. 流式细胞仪分析1) 用流式细胞仪检测,激发波长 Ex=488 nm; 发射波长 Em=530 nm。2) Annexin V-FITC 的绿色荧光通过 FITC 通道(FL1)检测;PI 红色荧光(流式 Ex=488nm,Em≥630nm)通 过 FL2 或 FL3 通道检测,建议使用 FL3。3) 荧光补偿调节:使用经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。注意事项:1、微量试剂取用前请离心收集。2、Annexin V-FITC,
货号
BL107A
规格
50 T
品牌
Biosharp
象形图 |
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警示语 |
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Class |
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警告声明 |
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UNub |
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危险声明 |
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Packing Group |
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