碧云天生产的Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶)，也称Anti-Flag IP Gel、Anti-Flag免疫沉淀凝胶或Anti-Flag琼脂糖凝胶，由高质量的单克隆鼠源Flag抗体与琼脂糖共价偶联而成，可与常规蛋白表达系统(如哺乳动物细胞、细菌或酵母)中含有Flag标签的蛋白结合，从而用于带有Flag标签的融合蛋白或蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或纯化。 Flag标签(Flag-tag)、Myc标签(Myc-tag)、HA标签(HA-tag)、His标签(His-tag)和GST标签(GST-tag)等是表达载体上最常见的一些标签，通过与这些标签的融合表达可以非常方便地检测目的蛋白及与目的蛋白相互结合的蛋白，也可以非常方便地用于目的蛋白的纯化。Flag-tag是8个氨基酸残基(DYKDDDDK)组成的多肽，常用的形式有Flag和3X Flag，通过基因重组技术把Flag-tag的核酸序列与目的基因的5’端或3’端连接，就可以最终表达形成Flag-tag的目的蛋白。Flag-tag具有以下优点：Flag-tag通常不会与目的蛋白相互作用，并且大多数情况下不会影响目的蛋白的功能；Flag-tag作为标签蛋白，后续通过Flag抗体(AF519/AF2852)、Anti-Flag磁珠(P2115)或Anti-Flag亲和凝胶(P2271/P2282)即可对目的基因的表达、定位及功能进行检测或对目的蛋白进行纯化、免疫沉淀或免疫共沉淀等；融合在N端的Flag标签，可被肠激酶(Enterokinase, EK)切除(DDDK)，从而得到完美的没有标签的目的蛋白。基于以上优点，Flag标签已被广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、相互作用和功能等多方面的研究。 Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶)，也被称为Anti-DYKDDDDK Affinity Gel/Beads/Resin或Anti-DYKDDDDK IP Gel/Beads/Resin，可特异性地结合Flag标签融合蛋白，广泛应用于带有Flag标签的融合蛋白或蛋白复合物的免疫沉淀或纯化等实验。 本产品有较高的融合蛋白结合量、特异性强：每ml纯凝胶(settled gel)含有约8mg Flag抗体，可结合约1mg融合蛋白，且特异性强，非特异的杂蛋白结合少。 本产品可结合多种形式的Flag标签蛋白：本产品可特异性地结合甲硫氨酸修饰的N端Flag融合蛋白(Met-Flag-Protein)、N端Flag融合蛋白(Flag-Protein)、C端Flag融合蛋白(Protein-Flag)或中间带有Flag的融合蛋白。 本产品可选择多种洗脱方法：本产品根据蛋白结构的完整性、生物功能及后续应用的要求等，可使用多种洗脱方法，包括Flag多肽、酸性和SDS-PAGE上样缓冲液等洗脱液进行洗脱。特别是Flag多肽洗脱后不包含抗体的轻链和重链，可以有效解决免疫沉淀后Western实验中轻链和重链的干扰问题。 本产品可重复使用多次，性价比高：在正常情况下，本产品用于相同蛋白的纯化时可回收使用3-5次。如果用于免疫共沉淀检测蛋白-蛋白的相互作用，不推荐重复使用。 本产品的主要指标如下表： Cat. No. P2282 P2271 Product name Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) Anti-Flag Affinity Gel (Anti-Flag亲和凝胶) Product content 50% settled gel in 50% glycerol with 10 mM phosphate-buffered saline and preservative (pH7.4) 50% settled gel in TBS with preservative (pH7.6) Matrix 4% agarose 4% cross-linked agarose Average bead size ~90μm Antibody Mouse monoclonal antibody against Flag-tag Isotype IgG2b M.W. of antibody Approximately 150kDa Antibody concentration Approximately 8mg Flag antibody per ml settled gel Binding capacity Approximately 1mg Flag-tagged protein per ml settled gel Elution method Acid, alkaline, neutral, peptide competitive or SDS-PAGE loading buffer elution. Note: If elute with SDS-PAGE loading buffer, the light (~25kDa) and heavy (~50kDa) chain of antibody will be denatured and release from the gel. Reagent compatibility Chaotropic reagents will denature the target Flag-tagged protein. Do not exceed 0.3M GuHCl or 1.5M Urea. Application Suitable for IP、Co-IP and protein purification. Storage -20℃ 4℃ 本产品为50%凝胶悬液，包装体积为总体积，每毫升本产品中共含有0.5ml纯凝胶(沉淀物)。

保存条件：451℃保存。

注意事项：本产品使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
本产品含有微量的防腐剂，不会影响常规的蛋白或蛋白复合物的纯化和免疫沉淀。但如果后续涉及酶活性测定，使用本产品前宜先用TBS等适当溶液洗涤凝胶3次，以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
在免疫沉淀或纯化时，建议设计阳性和阴性对照组。
蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的P1005/P1006蛋白酶抑制剂混合物(通用型)、P1048/P1049蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)、P1010/P1011蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)、P1050/P1051蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)等，或P1025/P1026蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用)。
高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。
若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。