TMB显色液(ELISA HRP显色用)(TMB Chromogen Solution for ELISA, TMB Substrate Solution for ELISA or TMB
Solution for ELISA)是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术,通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色,用于ELISA等的显色液。本显色液也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
通常的TMB显色试剂由多个组份组成,必须在使用前进行配制,并且容易产生沉淀,使用相对不太方便,并且也容易导致检测结果不太稳定。本TMB显色液采用了最新的TMB显色技术,把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中,仅由单一溶液组成,简化了操作步骤,并且使检测结果更加稳定可靠。
TMB,即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine,是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下,TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。不同浓度辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗使用本产品的检测效果参见图1。
图1. 不同浓度辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗使用本产品的检测效果图。辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (A0208)用PBS稀释至图中所示浓度,各取20微升,加入200微升本产品,分别在5分钟和30分钟时检测A370。从结果可知,5分钟时,HRP浓度在0-0.1%范围内呈较好的线性关系;30分钟时,HRP浓度在0-0.06%范围内呈较好的线性关系。实测数据会因试剂、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
辣根过氧化物酶催化TMB显蓝色后可以使用碧云天的TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)、TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性) (P0217)或自行配制的2M H2SO4终止反应。加入TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸)或硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在450nm测定吸光度;加入TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性)后,溶液保持蓝色不变,此时可在620-650nm测定吸光度。两种TMB显色终止液加入后的吸光度检测和实拍显色效果图参考图2和图3。
图2. 不同浓度辣根过氧化物酶加入本产品后,再使用TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)终止反应后的检测效果图。左图为不同浓度的HRP标记的二抗(A0208 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (H+L)),加入本产品室温反应5分钟后A370的吸光值,及加入TMB显色终止液(450nm, 不含硫酸) A450的吸光值的线性图。右图为两者的实拍显色效果图。图中数据仅供参考,实际的检测效果可能会略有不同。
图3. 不同浓度辣根过氧化物酶加入本产品后,再使用TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性) (P0217)终止反应后的检测效果图。左图为不同浓度的HRP标记的二抗(A0208 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (H+L)),加入本产品室温反应5分钟后A370的吸光值,及加入TMB显色终止液(650nm, 无腐蚀性) A650的吸光值的线性图。右图为两者的实拍显色效果图。图中数据仅供参考,实际的检测效果可能会略有不同。
本试剂盒最常用于ELISA检测,也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
用于ELISA检测时,每个样品通常使用0.1毫升显色液,每100ml本产品共可以检测约1000个样品。保存条件:102℃保存。注意事项:本彩色预染蛋白质分子量标准不可在100℃加热或煮沸,并不得加热至40℃以上,室温融化后混匀即可直接使用。煮沸5分钟会导致约50%的条带发生降解或脱色。本彩色预染蛋白质分子量标准用1X SDS-PAGE上样缓冲液配制,不适用于非变性PAGE胶。预染蛋白质分子量标准每一批次的分子量大小可能有所不同,属正常现象。请参考随产品所附的说明书确定精确的分子量。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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